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腦聲常談:淺析腦外傷動物模型的認(rèn)知障礙評價方法

2024-10-07 13:31
來源:澎湃新聞·澎湃號·湃客
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腦外傷動物模型上針對認(rèn)知障礙的行為學(xué)評價方法,主要包括的動物模型有自由落體撞擊傷(Feeney's weight-dropping)模型、液壓沖擊傷(fluid percussion injury, FPI)模型、控制性皮層損傷(controlled cortical impact, CCI)模型、閉合性腦損傷(closed head injury, CHI)模型、旋轉(zhuǎn)加速損傷模型等。Morris 水迷宮(Morris Water Maze, MWM)是用于評價海馬病變大鼠的空間記憶能力的行為學(xué)方法。MWM可以用來檢測記憶和學(xué)習(xí)能力、空間參考記憶和空間工作記憶。目前MWM是國內(nèi)外學(xué)者廣泛應(yīng)用于多種模型的認(rèn)知能力評價方法,同時它也是評價腦外傷模型認(rèn)知障礙應(yīng)用最多的行為學(xué)方法。

Morris水迷宮,型號:XR-XM101

MWM由圓形水池、自動攝像機及電腦分析系統(tǒng)組成。圓形水池被等分為4個象限,以水池邊緣相等分布的4個點作為入水點,站臺位于某一象限內(nèi)。測試前將水注入池中,水面高出站臺表面,使大鼠或小鼠不能見到站臺。加入某種不影響實驗的物質(zhì)以使水變得不透明并將水面的顏色和動物顏色區(qū)別開。水溫控制恒定。實驗在隔音、較暗的房間內(nèi)進(jìn)行,各種實驗條件保持不變。目前有多種模型使用該方法測試認(rèn)知能力,并應(yīng)用于藥物研究中。考慮到腦外傷模型會造成運動障礙,因此為了排除運動障礙對MWM中表現(xiàn)的影響,有學(xué)者在進(jìn)行水迷宮測試之前使用神經(jīng)功能損傷評分(neurological severity scale, NSS)等對其運動功能進(jìn)行評定。

目前經(jīng)典的MWM檢測方法主要包括定向航行實驗、空間探索實驗(撤臺實驗)和露臺實驗。

定向航行實驗:

平臺固定在水面下,動物在不同象限入水,用60 s或120 s探索平臺。每天訓(xùn)練2~5次,每天在同一時間進(jìn)行訓(xùn)練,一般連續(xù)訓(xùn)練2~5 d或更長時間。訓(xùn)練的主要目的是為了使動物能夠憑空間記憶準(zhǔn)確定位平臺的位置。該實驗記錄動物到達(dá)平臺的時間,即逃避潛伏期,用于評價動物的空間學(xué)習(xí)記憶能力。

空間探索實驗:

一般在定向航行實驗結(jié)束后24 h進(jìn)行,也有學(xué)者在每天進(jìn)行完定向航行實驗之后進(jìn)行一次空間探索實驗。實驗時將平臺撤去,一般選擇平臺所在位置的對側(cè)象限為動物入水點。動物入水后,限時60~120 s,實時監(jiān)控記錄動物游泳軌跡。記錄限定時間內(nèi)動物進(jìn)入目標(biāo)區(qū)域(原平臺所在位置)的次數(shù)和累計時間,以及動物進(jìn)入目標(biāo)象限的時間等指標(biāo),用于評價動物的空間工作記憶。

露臺實驗:

一般在水迷宮測試之前或測試的最后進(jìn)行。平臺露出水面,動物入水,記錄其找到平臺的時間、游泳速度等。該指標(biāo)一般用來檢測動物是否存在影響水迷宮中表現(xiàn)的運動障礙,進(jìn)而排除模型動物因運動障礙對測試結(jié)果造成的影響。除了前述經(jīng)典實驗方法外,有些學(xué)者對方法進(jìn)行了適當(dāng)?shù)母牧?,包括測試時間、檢測指標(biāo)等。經(jīng)典的水迷宮測試要用將近1周時間,有些學(xué)者為了縮短測試周期而進(jìn)行改良。改良后的測試方法只需要1 d就可以完成訓(xùn)練和測試。選擇不同的入水點,多次入水訓(xùn)練60 s,每次訓(xùn)練間有一定的間隔時間。之后可以分別進(jìn)行露臺實驗和空間探索實驗。該方法1 d內(nèi)完成,主要測試動物的短時記憶。測試1 d后有學(xué)者在第2天進(jìn)行反轉(zhuǎn)探索實驗,即第2天訓(xùn)練方式同第1天類似,但平臺的位置移動到原來位置的對側(cè)象限。記錄動物的逃避潛伏期、探索方式(包括直線式、趨向式)等,評價動物的認(rèn)知能力。

平臺的位置在訓(xùn)練過程中除了保持不動之外,還可以在每次訓(xùn)練時變更其在象限中的位置。經(jīng)典的方法中,平臺固定對于動物來說記憶起來相對簡單,而且在空間探索實驗時動物的探索容易受到干擾。通過移動平臺等方式對其進(jìn)行改良,能更準(zhǔn)確地測定空間探索能力,不僅測試參考記憶能力,還測試轉(zhuǎn)換探索策略的能力。該方法在每次航行訓(xùn)練中,平臺的位置在目標(biāo)象限內(nèi)隨機變換,包括中心和水池邊緣的中間點、水池邊緣附近、靠近中心附近、目標(biāo)象限邊緣等。這樣在最后一次空間探索時,動物就會在目標(biāo)象限內(nèi)尋找平臺,避免動物在找不到平臺時放棄的情況發(fā)生。

測試時,每天進(jìn)行4次訓(xùn)練,連續(xù)5 d,選擇不同入水點,平臺位于目標(biāo)象限不同位置。記錄動物在目標(biāo)象限的時間和找到平臺的潛伏期作為評價指標(biāo)。除了改良測試方法外,有些研究者通過改良記錄數(shù)據(jù)或統(tǒng)計數(shù)據(jù)的方法來達(dá)到自己的研究目的。例如在進(jìn)行定向航行實驗時,連續(xù)7 d每天訓(xùn)練2次,間隔5 min。其中第1次訓(xùn)練結(jié)果反映動物對前一天訓(xùn)練結(jié)果的記憶,即長時程記憶;而第2次訓(xùn)練結(jié)果反映的是動物對5 min前訓(xùn)練結(jié)果的記憶,即短時程記憶。通過分析不同指標(biāo)的變化,達(dá)到測試動物不同類型記憶能力的目的。

另外也有學(xué)者在進(jìn)行空間探索實驗時,記錄一定時間內(nèi)動物在不同區(qū)域內(nèi)的時間。之后用在不同區(qū)域的時間乘以相應(yīng)區(qū)域的權(quán)重(離平臺越近,權(quán)重越大),計算出分值用來評定記憶能力。

找實驗方法,上腦聲常談。

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