社交恐懼癥（social phobia，SP），又稱社交焦慮癥（social anxiety disorder，SAD），是指對(duì)某些社交情境過(guò)度的恐懼，屬于焦慮癥的一個(gè)亞型。采用選擇性足底電擊的方式，使小鼠特異性地對(duì)與同類接觸的行為產(chǎn)生恐懼。

實(shí)驗(yàn)分組

將ICR小鼠隨機(jī)分為條件性社交刺激（conditioned social stimulus，CSS）組和非社交刺激（non-social stimulus，NSS）組，每組10只。條件性電擊誘導(dǎo)前，小鼠至少孤養(yǎng)7 d，以增強(qiáng)其社交動(dòng)機(jī)。飼養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)（5天）：在這個(gè)階段，小鼠將從多只同籠飼養(yǎng)轉(zhuǎn)換為單只飼養(yǎng)，以讓小鼠提前適應(yīng)模型建立后動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境；

造模環(huán)境適應(yīng)（1天）：在此階段，小鼠將自由探索造模環(huán)境10分鐘，以讓小鼠明白造模環(huán)境本身是安全的，這可以讓小鼠更好地建立對(duì)社交刺激的恐懼而不是對(duì)環(huán)境的恐懼。

條件性足底電擊

造模（1天）：在這個(gè)階段，每當(dāng)小鼠同刺激鼠社交的時(shí)候就給與足底電擊，以在小鼠中誘導(dǎo)出社交恐懼表現(xiàn)。首先將實(shí)驗(yàn)小鼠放入條件性恐懼箱內(nèi)適應(yīng)環(huán)境3 min；而后將一只空鼠籠（由黑色金屬網(wǎng)制成，為底面直徑8cm，高9cm的圓柱體）放入條件性恐懼箱3min，令實(shí)驗(yàn)小鼠自由接觸；最后，在同樣的鼠籠中放入一只與實(shí)驗(yàn)小鼠體重相當(dāng)?shù)耐愋∈螅ㄉ缃徽T導(dǎo)鼠），并放入條件性恐懼箱，替換空鼠籠，最長(zhǎng)放置6min。密切觀察CSS組實(shí)驗(yàn)小鼠的行為活動(dòng)，每次在其主動(dòng)接觸社交誘導(dǎo)鼠同時(shí)，給予足底電擊1次（0.7 mA，持續(xù) 1s），而在其接觸鼠籠時(shí)不給予電擊。當(dāng)CSS組小鼠持續(xù)2min不再接觸社交誘導(dǎo)鼠，或遭足底電擊達(dá)到5次時(shí)，則誘導(dǎo)終止。NSS組實(shí)驗(yàn)小鼠以同樣的方式與社交誘導(dǎo)鼠接觸，但不給予任何電擊刺激。誘導(dǎo)結(jié)束后，各組動(dòng)物放回原飼養(yǎng)籠繼續(xù)孤養(yǎng)。

Fig1 條件性社交恐懼范式示意圖

社交探究行為檢測(cè)

于誘導(dǎo)后d2和d15，分別對(duì)條件性足底電擊誘發(fā)的小鼠社交恐懼短期效應(yīng)和長(zhǎng)期效應(yīng)進(jìn)行社交探究行為檢測(cè)。在行為檢測(cè)前一天，將空鼠籠放入實(shí)驗(yàn)小鼠的飼養(yǎng)箱內(nèi)過(guò)夜，以排除非社交應(yīng)激因素的干擾。為減少無(wú)關(guān)應(yīng)激干擾，社交探究行為檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)小鼠各自飼養(yǎng)籠內(nèi)進(jìn)行，飼養(yǎng)籠由棕色有機(jī)玻璃制成，25cm×15cm×15cm，頂部為不銹鋼柵籠蓋，底部鋪以厚度為1~2cm的鋸末。測(cè)試共分4個(gè)時(shí)段，每段持續(xù)3min，間隔2min，每一時(shí)段將裝有社交誘導(dǎo)鼠的鼠籠放入飼養(yǎng)箱一端的中間位置，每次更換一只陌生的社交誘導(dǎo)鼠。距離鼠籠邊緣3cm內(nèi)的區(qū)域即為社交探究區(qū)域。觀察指標(biāo)為每時(shí)段實(shí)驗(yàn)小鼠在社交探究區(qū)域內(nèi)停留時(shí)間百分比［（累計(jì)停留時(shí)間 /180s）×100%］。

其他行為學(xué)檢測(cè)

行為學(xué)測(cè)試（1天）：在該階段，小鼠的社交恐懼程度將在社交偏好-回避范式（the social preference-avoidance test）或三箱社交范式（the three-chamber social interaction test）中檢測(cè)。統(tǒng)計(jì)對(duì)刺激鼠的探索時(shí)間、探索次數(shù)和速度；對(duì)于三室社交互動(dòng)測(cè)試，計(jì)算平均嗅探持續(xù)時(shí)間。為評(píng)估實(shí)驗(yàn)小鼠是否伴隨廣泛性焦慮或抑郁樣行為，可在條件性足底電擊后d3、d4、d5分別進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、明暗箱穿梭實(shí)驗(yàn)及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

電擊前及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中持續(xù)孤養(yǎng)，可以增強(qiáng)小鼠的社交接觸動(dòng)機(jī)，提高模型成功率。

在社交探究過(guò)程中，每次更換陌生的社交誘導(dǎo)鼠，可避免恐懼行為指向某一特定個(gè)體，從而確保社交恐懼的泛化特征。

文獻(xiàn)引用

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